导言
       一提起Western blot，大家会不禁联想到Southern blot和Northern blot。其实它们的名字也是个有趣的故事。1975年，Edwin Southern教授发明了DNA杂交检测技术，故命名为Southern blot。之后，James Alwine、David Kemp和George Stark三位教授又发明了RNA杂交检测技术，因与Southern blot相似，故命名为Northern。George Stark这位牛人教授在两年后又开发出类似的蛋白质检测方法。1981年，Neal Burnette将其命名为Western blot。为什么当时没叫Eastern blot呢？这无从考证，不过科学家们还真是挺有创意的。

       30年来， Western blot技术已成为蛋白质研究中最常用的工具。它的标准流程如下：蛋白质首先通过SDS聚丙烯酰胺凝胶电泳分离，再通过电泳转移到固相支持物上，固相支持物包括硝酸纤维素膜、PVDF膜和尼龙膜。首先将膜上未反应的位点封闭起来，以抑制抗体的非特异性吸附，这样固定的蛋白质即可与特异性的多克隆或单克隆抗体相互作用。最后通过放射、生色或化学发光的方法进行定位。

      Western从技术上理解并不困难，但问题在于耗时长，步骤多，重复性不佳。好在近几年，尤其是这五年来，市场上涌现出不少新产品、好东西，让Western blot的流程快了不少，在这个讲求效率的年代，速度快、效率高是多么重要啊。同时，生物通也陆续发布了不少Western方面的攻略和心得体会，能帮助大家解决一些常见的问题。在此，我们将这些好物和攻略整理成专题，推荐给大家。

蛋白电泳
      SDS-PAGE可不比琼脂糖凝胶电泳，准备的试剂多，耗时也长，一般来说，从配胶到电泳大概要花2个小时。到了夏天还老是头疼，怎么还没凝呢？如今，使用预制胶，一撕开包装即可电泳，耗时大约在35分钟-1个小时，无论如何，也节约了一半时间。重复性当然比手工配制的要好。有时，生怕蛋白没分开，有时，又怕小蛋白跑出去了，这时，蛋白Marker可就是必备良品啊。

谁可小看“蛋白标准” 蛋白Marker是要是用来指示蛋白条带所对应的分子量大小，只有标准量精确无误了，实验结果才有说服力，除此之外，蛋白标准还有表示转移成功或者蛋白在凝胶上的电泳程度等等的作用，所以选择正确的蛋白Marker也是Wb实验成功的必要条件之一。 上篇 中篇 下篇

预制胶——轻松应对蛋白电泳 现在，SDS-PAGE已经成为实验室的最常规实验了。不过可别小看了这个实验，它比核酸电泳可复杂多了，需要准备的试剂多，耗时也长，而且每一次跑出来结果可能都不一样。有时只是为了补一张漂亮的电泳图片，却花了好几天时间，横竖还是不满意。这时，你就可以考虑一下预制胶了。本文对市场上最热销的几种预制胶进行了分析和对比，帮您选择最适合的产品。详细

转膜和封闭
      转膜可谓Western blot中的关键一步。转膜效率的高低，直接影响了Western的结果。在过去，转膜大约需要1小时；如今，新型转印仪的出现，让转膜时间一缩再缩。3分钟，出去喝杯水的时间，已经转好了。不服不行吧，科学技术就是生产力啊。

3款快速转印系统大比拼 近几年，一些新产品的出现，让Western blot的效率提高了不少，快速转印系统正是其中之一。2007年，Invitrogen率先推出了iBlot快速蛋白转印仪，将蛋白转印时间缩短至7分钟，让人耳目一新。之后，赛默飞世尔科技也推出了一款半干式的快速转印仪。今天，Bio-Rad在全球同步上市Trans-Blot Turbo全能型蛋白转印系统，更是将转印时间缩短至3分钟。详细参数对比

转膜经验谈 如何做这个“海绵—几层滤纸—胶—膜—几层滤纸—海绵”的“三文治夹心”，在分子克隆上已经有详细的介绍。这里我们就来谈谈一些需要注意的细节。详细

全能型蛋白转印系统（Bio-Rad）	iBlot干式转印仪（Invitrogen）	Pierce Western Blot快速转印系统（赛默飞世尔）

全自动的Western Blot——恭喜你，解放啦!
      对于传统的Western blot而言，结果的重复性一直是个挑战，因为缺乏标准化的操作，且多个操作步骤引入了实验可变性。如今，全自动Western blot分析的出现，让结果的重复性更好。整体的定量也大大改善了，因为省去了转印步骤，从而避免了蛋白转移的不一致。当然，省时省力那就不必说了，不过，就是不省钱。

一台名叫Simon的仪器 美国proteinsimple公司推出了一种Simple Western 分析，彻底改变了整个Western blot。此分析在一台名为Simon的仪器上开展，Simon将所有实验步骤自动化，包括蛋白上样和分离、免疫印迹、洗涤、检测以及数据的定量分析，让研究人员从繁重的劳动中解放出来，同时避免了可能影响实验重复性的人为因素。详细

一个简单的流程

一个定量的分析结果

抗体孵育和检测

显色篇：八仙过海，各“显”神通 各大厂家都在不断开发更方便更灵敏的新产品，“idea是生产力”嘛，因此生物通这里介绍一些能把我们从日常操作中解脱出来，获得“升级版”效果WB产品。 上篇 下篇

化学发光仪ChemiDoc XRS应用心得 我们实验室从05年开始采用Bio-Rad的ChemiDocXRS进行化学发光的检测，目前已经形成一套较为成熟的技术路线，取得大批的实验数据。本文将就Western Blotting的关键步骤及使用ChemiDocXRS的一些心得体会与大家一起分享。详细

如何优化抗原和抗体的浓度 每一个Western blot都涉及到抗原和抗体的相互作用，因此，抗体浓度并不是一成不变的，优化很重要。一抗和二抗浓度取决于每个抗体的特异性和抗原的特异性，以及样品中存在的抗原量。如何优化？

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