核酸检测的一场革命,可替代PCR的犀利技术
■ 什么是RPA技术 :
RPA技术主要依赖于三种酶:能结合单链核酸(寡核苷酸引物)的重组酶、单链DNA结合蛋白(SSB)和链置换DNA聚合酶。这三种酶的混合物在常温下也有活性,最佳反应温度在37°C左右。 重组酶与引物结合形成的蛋白-DNA复合物,能在双链DNA中寻找同源序列。一旦引物定位了同源序列,就会发生链交换反应形成并启动DNA合成,对模板上的目标区域进行指数式扩增。被替换的DNA链与SSB结合,防止进一步替换。在这个体系中,由两个相对的引物起始一个合成事件。整个过程进行得非常快,一般可在十分钟之内获得可检出水平的扩增产物。
■ RPA技术的实战攻略:
PCR替代技术,RPA全攻略之疑难解答 了解了RPA技术的原理和特色,现在你一定对这个技术产生了不少疑问。 PCR替代技术,RPA全攻略之引物设计 RPA的扩增引物可以说是整个反应的关键所在,那么怎样才能设计好RPA引物呢? PCR替代技术,RPA引物与探针的常见问题 在RPA扩增的基础体系中添入不同的酶和探针,可以实现多样化的RPA应用。
■ RPA技术的应用:
RPA在HIV检测中大显身手 PCR是婴儿HIV诊断的金标方法,但许多地区并不具备这样的条件,而RPA技术正好可以大展身手。 RPA在癌症研究中的应用 RPA不仅可以实现癌症突变的快速检测,还能用于抗癌药物的快速筛选。 RPA检测埃博拉等致命病毒 研究者们在RPA技术的基础上,开发了检测多种致命病毒的快速方案。 RPA成为致病菌检测的得力工具 在临床诊断和食品安全领域,RPA技术可以对常见致病菌进行快速检测。 农科院专家用RPA快速检测转基因作物 要更好的管理转基因作物,就需要快速而简便的检测方法 RPA技术试水二代测序的文库制备 未来,经过优化的RPA技术将有望用于二代测序的样本制备。