生物通

生物通首页 > 今日动态 > 专题总汇 > 核酸检测的一场革命,可替代PCR的犀利技术


       自PCR技术诞生以来已经有三十年了。从经典PCR、实时定量PCR再到现在的数字PCR,这一技术在不断蜕变却从未淡出我们的视野。重组酶聚合酶扩增RPA,被称为是可以替代PCR的核酸检测技术。以此为基础的TwistAmp® 核酸扩增产品,能够在15分钟内进行常温下的单分子核酸检测。

核酸检测的一场革命,可替代PCR的犀利技术




      什么是RPA技术


RPA技术主要依赖于三种酶:能结合单链核酸(寡核苷酸引物)的重组酶、单链DNA结合蛋白(SSB)和链置换DNA聚合酶。这三种酶的混合物在常温下也有活性,最佳反应温度在37°C左右。

重组酶与引物结合形成的蛋白-DNA复合物,能在双链DNA中寻找同源序列。一旦引物定位了同源序列,就会发生链交换反应形成并启动DNA合成,对模板上的目标区域进行指数式扩增。被替换的DNA链与SSB结合,防止进一步替换。在这个体系中,由两个相对的引物起始一个合成事件。整个过程进行得非常快,一般可在十分钟之内获得可检出水平的扩增产物。

生物通

RPA检测不仅速度快而且灵敏度很高,能够将痕量的核酸模板扩增到可以检出的水平。RPA既可以扩增DNA也可以扩增RNA,还省去了额外的cDNA合成步骤。你不仅可以对扩增产物进行终点检测,还可以对扩增过程进行实时监控,甚至能通过试纸条(侧流层析试纸条LFD)读取结果。



      RPA技术的实战攻略


PCR替代技术,RPA全攻略之疑难解答
了解了RPA技术的原理和特色,现在你一定对这个技术产生了不少疑问。

PCR替代技术,RPA全攻略之引物设计
RPA的扩增引物可以说是整个反应的关键所在,那么怎样才能设计好RPA引物呢?

PCR替代技术,RPA引物与探针的常见问题
在RPA扩增的基础体系中添入不同的酶和探针,可以实现多样化的RPA应用。



      RPA技术的应用


RPA在HIV检测中大显身手
PCR是婴儿HIV诊断的金标方法,但许多地区并不具备这样的条件,而RPA技术正好可以大展身手。

RPA在癌症研究中的应用
RPA不仅可以实现癌症突变的快速检测,还能用于抗癌药物的快速筛选。

RPA检测埃博拉等致命病毒
研究者们在RPA技术的基础上,开发了检测多种致命病毒的快速方案。

RPA成为致病菌检测的得力工具
在临床诊断和食品安全领域,RPA技术可以对常见致病菌进行快速检测。

农科院专家用RPA快速检测转基因作物
要更好的管理转基因作物,就需要快速而简便的检测方法

RPA技术试水二代测序的文库制备
未来,经过优化的RPA技术将有望用于二代测序的样本制备。





版权所有 生物通
Copyright© ebiotrade.com, All Rights Reserved
联系信箱:info@ebiotrade.com