随着近年来转录组研究迅猛，以及高水平杂志对数据准确性的要求越来越高，要确定前期筛选靶标的表达量、分子功能及作用机制，必须经过原位的验证。对靶基因进行组织学水平或者细胞学水平的单分子RNA 原位杂交可以实现对研究对象的精准原位定量。除了是对传统蛋白水平IHC/IF和DNA 水平DNA FISH原位验证的有力补充，Stellaris RNA FISH由于不受抗体的限制，在肿瘤、病毒、神经疾病、植物、微生物及特殊物种研究领域有着独特的优势，且对于时下热门的lncRNA、miRNA、cirRNA等不表达蛋白的非编码RNA，也是绝佳的选择。

这期小编就近期发表的几篇StellarisTM RNA FISH应用在人体病理学研究中的文献给大家做下介绍~

首先一篇发表在scientific reports 上的文献研究了Zika病毒（ZIKV）在原代人胎盘滋养细胞中的复制。大家可能知道，寨卡病毒是一种新兴的蚊虫传播的虫媒病毒。曾在2015-16年期间世界范围内大面积爆发，虽然寨卡病毒以前一直主要表现为轻度的或无症状的类似登革热的疾病，但是在美洲国家的出现伴随着胚胎头小畸型和脑畸形的发病率大大增加。故这种病毒对孕妇和胎儿尤其危险。

在本研究中，显示了原代人胎盘滋养层细胞可被原代 ZIKV-FLR分离株感染, 而且特异地允许ZIKV病毒RNA 复制，而不会允许登革热病毒复制。不仅通过qPCR定量，而且还用Stellaris™单分子RNA FISH直接观察到寨卡病毒RNA在原代人类胎盘滋养层细胞中的复制。真正实现眼见为实！

能被ZIKV感染之余, 原代滋养层还表达多种公认的ZIKV病毒进入细胞受体, 并保留了细胞功能和分化。这些研究表明，ZIKV-FLR菌株可以在人胎盘滋养层中复制，而不会引起宿主细胞的破坏， 因此可能提供传播给胎儿的储库和入口，使胎儿存在潜在的头小畸型和脑畸形风险。

其次，以下这篇发表在nature communications上的研究成果是有关于肝癌YAP1信号通路的激活的。lncBRM的表达水平与YAP1信号通路的靶点均与HCC病人的肿瘤严重程度呈正相关。因此，作者预测lncBRM和YAP1信号通路可能可以作为HCC诊断和潜在药物靶点的生物标志物。

在本篇研究中，LncBRM在肝脏CSCs和HCC肿瘤中的表达、定量和定位以及与BRM结合的研究就是用的biosearch Stellaris™ 技术设计的lncBRM探针杂交实现的。而且也实现了RNA和蛋白的共定位。

Figure 3 | LncBRM associates with BRM to initiate the BRG1/BRM switch.(e) Non-spheres and spheres were visualized by fluorescence in situ hybridization (FISH). Scale bar, 10 mm.

还有研究报道使用Stellaris™ 单分子荧光原位杂交进行神经退行性疾病研究，研究结果已发表在权威杂志PNAS上。

SMA脊髓性肌萎缩，是一种以进行性运动神经元缺失为特征的神经退行性疾病，由SMN1基因的突变所引起。该疾病的严重程度与SMN2基因的拷贝数呈负相关。SMN2是一个与SMN1几乎一样的被复制的基因。作者阐明了SMN2位点的转录调节机制：LncRNA通过将PRC2招募到SMN2位点而抑制其表达，并能够破坏lncRNA与PRC2之间的相互作用的化学修饰寡核苷酸，抑制了原代培养的神经元细胞中PRC2的招募，从而增加了SMN2的表达。该方法是一种基因上调技术，调节lncRNA和PRC2之间的相互作用。该技术可被用于治疗那些由特定位点的表观遗传沉默而引起的疾病。

Fig. 2. Identification of a lncRNA at the SMN locus, SMN-AS1. (E) Strand-specific single-molecule RNA-FISH. Maximum intensity merge of widefield z stack in GM09677 SMA fibroblasts of the nascent SMN pre-mRNA (red, detected by a set of intronic probes), the mature SMN mRNA (yellow), and the SMN-AS1 lncRNA (blue). Pre-mRNA signals are offset (up + left) and mature mRNA signals are offset (down + right) by 2 pixels to enable visualization.

看了这些很赞的文章，很漂亮的图片，是不是觉得，想发高分文章，怎能少了单分子荧光原位杂交！

Stellaris™ smFISH（单分子荧光原位杂交技术）是基因公司代理的LGC Biosearch公司明星产品，提供在完整细胞或组织中对单拷贝RNA进行原位观察及定量的解决方案。该技术自发明以来，以操作简单、灵敏度高、特异性好且适用性广而著称，同时非常适合于多重RNA共定位，以及RNA-蛋白共定位。

作为设计、开发和生产荧光引物/探针和相关分子诊断试剂的全球领导者，Biosearch的Stellaris RNA FISH技术近年来已得到了越来越多的科研工作者认可，引用的paper超过33%发表于Nature、Science、Cell及其子刊上。

如此人见人爱的Stellaris RNA FISH，它的实验操作是怎样的呢？像普通的RNA FISH一样很复杂需要耗时好几天甚至一星期吗？NO！

Stellaris RNA FISH方法操作很简单，由四个步骤组成，如下图所示。不需要特殊试剂，整个过程可以在不到一天内完成！

眼见为实，一天之内的RNA FISH！你get到了吗？