Part 1  膜的选择

印迹所使用的膜的类型可能影响下列因素：

• 蛋白质结合能力
• 是否需要用醇预湿
• 开展多次剥离（stripping）和再生检测（reprobing）实验的能力
• 蛋白质观察
• 长期印迹保存
• 信噪比

聚偏二氟乙烯（PVDF）和硝酸纤维素是Western印迹应用中最常用的两种类型的膜。

与硝酸纤维素膜相比，电转到PVDF膜上有许多优点。PVDF膜可提供更好的蛋白质截留率、物理强度和广泛的化学兼容性（Pluskal等，1986）。其中更高的机械强度和出色的耐化学性让PVDF膜成为免疫检测中各种染色应用和二次检测的理想选择。使用PVDF膜的另一个优点是，单块凝胶上的平行重复泳道可用于各种应用中，如考马斯蓝染色，接着切割条带进行N端测序，蛋白质水解/肽段分离/内部测序，以及免疫检测（Kurien等，2003）。市售的硝酸纤维素膜的典型结合能力是80 – 100 μg/cm²，而PVDF膜的结合能力是100 – 200 μg/cm²。

在检测血清中人免疫缺陷病毒（HIV）时直接比较PVDF和硝酸纤维素膜，结果表明，PVDF膜有着更好的总体HIV抗原截留率，并且有助于改善提高抗体对糖基化包膜抗原的检测（Lauritzen和 Pluskal，1998）。硝酸纤维素膜和PVDF膜的特性比较详见表1。

表1. PVDF和硝酸纤维素膜特性及应用的比较。

Immobilon® PVDF转印膜

默克密理博提供三种PVDF膜：

• Immobilon®-P膜（0.45 μm）是一种通用的基质，适用于一般的免疫印迹应用。
• Immobilon®-PSQ膜（0.2 μm）适用于蛋白质测序和低分子量蛋白的免疫印迹。它有着更高的蛋白质结合能力以及比0.45 μm膜更高的截留率。
• Immobilon®-FL膜（0.45 μm）是为荧光免疫检测而开发的。它在多种激发和发射波长范围内的荧光背景都极低。

Immobilon® 转印膜以卷膜和方片膜形式提供。预切好的膜与所有预制胶以及大部分市售的凝胶电泳系统兼容。Immobilon® 转印膜的性质详见表2。表3列出了与最常用的电泳系统相匹配的Immobilon® 预切膜的尺寸。表4列出了与现有的预制胶相匹配的Immobilon® 预切膜的尺寸。

表2. Immobilon® PVDF转印膜的性质和应用。

表3. Immobilon® PVDF预切转印膜和匹配的电泳系统。

表4. Immobilon® PVDF预切转印膜和匹配的预制胶。

（实际内容以《蛋白质印迹手册》印刷版为准，如有错漏，敬请谅解）

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