做CRISPR，用这个工具会让你事半功倍！[新品推荐]
【字体： 大 中 小 】 www.yiwulimax.com 时间：2016年4月15日 来源：联川生物
摘要：
CRISPR-Cas9特异性取决于前20 bp的sgRNA，因而存在一定的脱靶效应。所以开展CRISPR研究，需要合成相当数量的sgRNAs。如果采用传统方式合成大量sgRNAs，不仅合成费用高，而且合成效率低。科研人员急需经济高效的大规模合成寡核苷酸序列文库的方案，帮助他们更便利地开展CRISPR工作。
OligoMix®成功扮演CRISPR的Guide RNAs
在CRISPR-Cas9突变筛选中，研究人员需要将能够靶向成千上万个基因位点的guide RNAs克隆到病毒载体中，然后“投递”到靶向细胞中。通过鉴定guide RNAs在设定表型细胞中的富集情况，研究人员能够系统并快速地鉴定与特定表型相关的基因。为了使大规模筛选试验成为可能，就需要大规模合成guide RNAs。
OligoMix®正为那些希望大规模合成guide RNAs文库的研究人员提供了一套独一无二的解决方案。研究人员可以快速合成包含数千条完全定制化的序列文库，这些特异性单链寡核苷酸序列可识别基因组中特定的区域。
下面举几个OligoMix®作为CRISPR Guide RNAs的成功应用案例
Nat Biotechnol (2016) High throughput mapping of regulatory DNA.（IF=41.514）
图2 MERA实验方案
来自MIT（Gifford实验室）和Brigham and Women’s Hospital的研究人员证实，OligoMix®合成的guide RNAs文库在MERA技术中具备有效性。MERA技术全称是Multiplexed Editing Regulatory Assay，即基于CRISPR-Cas9的多重基因编辑调控实验的筛选方法。
Genome Res (2016) A new class of temporarily phenotypic enhancers identified by CRISPR/Cas9-mediated genetic screening.（IF=14.630）
图3 鉴定顺式调控元件的高通量CRISPR/Cas9介导筛选方案
Ludwig Institute for Cancer Research任兵教授团队以Oligomix®作为Guide RNAs，成功开发出一种基于CRISPR/Cas9基因组编辑的高通量筛选技术，可用于功能性筛选人类基因组中的顺式调控元件。研究团队将这一策略用于人类胚胎干细胞中POU5F1基因上，不仅揭示出一些经典的顺式调控元件，还发现一类非常规的调控元件。这些非常规的调控元件能够以一种意想不到的方式进行转录调控。
Methods Enzymol (2014) Adapting CRISPR/Cas9 for functional genomics screens.
图4 sgRNA文库合成与混合筛选策略
McGill University研究人员证实将寡核苷酸库（Oligomix®）克隆到逆转录病毒表达载体，可同时传递Cas9核酸酶和sgRNAs。这种方法为高通量功能基因组筛选提供了稳定和可重复性表达的基因编辑工具。
更多OligoMix®在CRISPR-Cas9中的前沿应用等你来实现！
参考文献
1.Gao X, Church, GM, et al. (2004) Accurate multiplex gene synthesis from programmable DNA chips. Nature 432,1050-1054.
2.Rajagopal N, Srinivasan S, Kooshesh K, Guo Y, Edwards MD, Banerjee B, Syed T, Emons BJ, Gifford DK, Sherwood RI (2016) High throughput mapping of regulatory DNA. Nat Biotechnol 34(2):167-74.
3.Diao Y, Li B, Meng Z, Jung I, Lee AY, Dixon J, Maliskova L, Guan KL, Shen Y, Ren B.(2016) A new class of temporarily phenotypic enhancers identified by CRISPR/Cas9-mediated genetic screening. Genome Res 26(3):397-405.
4.Malina A, Katigbak A, Cencic R, Maïga RI, Robert F, Miura H, Pelletier J. (2014) Adapting CRISPR/Cas9 for functional genomics screens. Methods Enzymol546:193-213.
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