2016版流式细胞仪选购指南[选购宝典]
【字体： 大 中 小 】 www.yiwulimax.com 时间：2016年6月17日 来源：生物通
摘要：
对于单个细胞及其他生物粒子的分析，流式细胞术已经成为一种不可或缺的方法。它让研究人员能够在单细胞水平高效地鉴定关键的标志物，如小分子、核酸以及肽段和蛋白。如今，仪器和试剂的创新为研究人员带来了更多的选择。如何选择一台适合的仪器？在选购中要注意些什么？赶快来看看吧。
光学系统
一旦细胞被聚焦成一束，它们就要接受光源（通常是激光）的拷问。光的破坏和散射，提供了有关细胞物理性质的信息。一些仪器包含多个激光光源，让用户获得更多数据。
在许多流式系统中，光的散射以两种方式被监控。前向散射光（FSC）带来细胞大小或表面积的信息。较小的细胞折射较少的光，而较大的细胞折射较多的光。第二种是侧向散射光（SSC），它提供了细胞复杂度的信息或内部结构的检测。综合这两个测量结果，研究人员可确定多个参数和功能，从而区分不同的细胞类型。
光散射模式只是提供了细胞的物理信息。若要拷问细胞的分子特征（如基因表达、蛋白定位或细胞周期的状态），细胞必须经过某种方式的标记。这通常使用荧光染料或荧光标记的抗体或纳米颗粒来实现的。
最近，一些聚合物染料（如BD Biosciences的Horizon和Sirigen试剂）已经出现，它们的亮度比传统染料亮几个数量级，让研究人员能实现更精细的检测，特别适合稀有细胞。同样地，不断增加的氨基活性染料也在帮助研究人员确定和排除死细胞，从而改善分析和分选的质控能力。
同时，纳米颗粒（如赛默飞世尔的Qdot纳米晶体）为长时间的实验带来了更加一致的荧光，因为它们不会发生光漂白，即使体外实验变成体内实验，比如干细胞移植到动物体内，它们也能被监控。
染料、抗体和纳米颗粒的选择在很大程度上取决于应用和目标。在针对一个非常特异的细胞类型时，如CD4+ T细胞，荧光标记的抗体让你能精确定量混合物中的这些细胞。不过许多应用并不需要这么精确，比如细胞活力或细胞周期分析。在这种情况下，染料就已经绰绰有余了。
不同的荧光基团在不同的波长下激发和发射，因此，许多流式细胞仪提供了多个光源（激光器）和发射滤光片。流式仪器中常用的激光器有：蓝色（488 nm）、黄绿色（561 nm）、红色（640 nm）、紫色（405 nm）和紫外光（355 nm）。许多厂商提供不同的滤光片，让研究人员能够实现多重检测，以监控多个标志物。这些实验的挑战在于优化荧光标记和现有的激光器，以便尽量减少光谱重叠。
无论是散射光还是荧光，细胞的光信号都由光电倍增管（PMT）收集，将光强度转换为电子读数。在某种程度上，PMT的灵敏度决定了检测的分辨率 – 你可以检测的颗粒或亚细胞组分有多小，以及你是否能很好地区分邻近细胞的信号。
对于某些仪器，特别是提供图像数据的仪器，PMT已被替换成CCD照相机。这些仪器不仅能提供荧光标记的强度信息，还能提供这些标记在细胞内的精确定位。对那些监控蛋白转位或细胞信号的实验而言，这特别有用。
当然，成像流式细胞仪虽然带来更多信息，也产生了更大的文件，带来数据存储的问题，不过将数据推送到云平台，可缓解这一问题。此外，分析和处理数据的软件正在改善，变得更加用户友好，让经验有限的研究人员也能轻松使用。
表1：各公司的流式细胞仪一览表
厂商 仪器 检测的光（FSC、SSC、FL）* 激光器数量 光通道数量 细胞分选功能 Acea Biosciences NovoCyte FSC,SSC,FL Up to 3 Up to 15 无 Apogee Flow Systems A50-Micro FSC,SSC,FL Up to 3 Up to 12 无 Universal FSC,SSC,FL Up to 3 Up to 12 无 Auto40 FSC,SSC,FL 1 Up to 5 无 BD Biosciences Accuri C6 Plus FSC,SSC,FL 2 Up to 6 无 FACSAria III FSC,SSC,FL Up to 6 Up to 20 有 FACSAria Fusion FSC,SSC,FL Up to 6 Up to 20 有 FACSVerse FSC,SSC,FL Up to 3 Up to 10 无 Influx FSC,SSC,FL Up to 10 Up to 16 有 LSRFortessa FSC,SSC,FL Up to 4 Up to 18 无 Beckman Coulter CytoFlex FL Up to 3 Up to 13 无 Gallios, 10-color FSC,SSC,FL Up to 4 Up to 12 无 MoFlo XDP FSC,SSC,FL Up to 5 (+ laser engine) Up to 20 有 Bio-Rad S3e FSC,SSC,FL Up to 3 Up to 6 有 Cell Signaling Technology CellSimple FSC,SSC,FL 1 Up to 4 无 NucleoCounter NC-3000 Darkfield, Brightfield, FL 8 (LEDs) 9 (interchangeable emission filters) 无 Cytonome Viva G1 FSC,SSC,FL 1 3 有 Hydris FSC,SSC,FL 1 3 有 Millipore FlowSight SSC Up to 5 Up to 12 无 ImageStreamX Mark II SSC Up to 7 Up to 12 无 Guava easyCyte 5 FSC,SSC,FL 1 Up to 5 无 Guava easyCyte 12HT FSC, SSC,FL Up to 3 Up to 13 无 Muse FSC,FL 1 Up to 3 无 GE Healthcare Cytell Brightfield,FL Up to 5 无 Handyem HPC-150 FSC,SSC,FL 1 or 2 Up to 6 无 IntelliCyt iQue Screener FSC,SSC,FL 2 Up to 6 无 Miltenyi Biotec MACSQuant Analyzer 10 FSC,SSC,FL 3 Up to 10 无 MACSQuant Tyto FSC,SSC,FL Up to 3 Up to 10 有 MACSQuant VYB FSC,SSC,FL Up to 3 Up to 10 无 Molecular Devices SpectraMax MiniMax Brightfield,FL Up to 3 3 无 Sysmex-Partec CyFlow Counter SSC,FL 1 Up to 3 无 CyFlow Space FSC,SSC,FL Up to 5 Up to 16 无 （可升级） Thermo Fisher Scientific Attune NxT FSC,SSC,FL Up to 4 Up to 16 无
* FSC = 前向散射光；SSC = 侧向散射光；FL = 荧光
（此表来自Biocompare，数据仅供参考）
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